Хід визначення
Підготовку проби для аналізу проводять відповідно до п.4.2.3. Потім 50 см3 розведення 1:10 вносять в колбу з 50 см3 середовища Кесслера з лактозою подвійної концентрації.
Посіви розміщують в термостаті за температури (37 +- 1) град.С на 48 год.
Після інкубації проводять висів на чашки із середовищем Ендо або Левіна. Посів проводять петлею так, щоб отримати ріст ізольованих колоній. Чашки з посівами розміщують в термостаті за температури (37 +- 1) град.С на 18-24 год.
При відсутності в середовищі Ендо або Левіна колоній, типових для БГКП (на середовищі Ендо - червоних з металевим блиском або без нього, рожевих і блідо-рожевих, в середовищі Левіна - чорних з металевим блиском, темних з чорним центром, коричневих з темним центром) засіяна проба вважається чистою; таким чином зразок відповідає нормативу за БГКП.
При наявності на середовищі Ендо або Левіна типових для кишкових паличок колоній, їх продовжують вивчати. Із ізольованих колоній, характерних або підозрілих за БГКП, готують препарати, фарбують їх по Граму і розглядають під мікроскопом. У грамнегативних паличок перевіряють оксидазну активність. Виконання оксидазного тесту здійснюється таким чином: петлею знімають колонії грамнегативних паличок із середовища Ендо або Левіна і наносять на фільтрувальний папір, змочений спеціальним реактивом (приготування якого описано в п.5.2.2.6). В місці нанесення бактеріальної маси колір фільтрувального паперу не зміниться, якщо оксидазний тест негативний і синіє протягом 1 хв., якщо оксидазний тест позитивний (наявність ферменту оксидази).
При наявності на поверхні середовища Ендо або Левіна колоній, складених із грамнегативних паличок з негативною оксидазною активністю їх відносять до бактерій групи кишкової палички після підтвердження ферментації глюкози. Для цього засівають дві-три колонії кожного типу в пробірки із середовищем Гісса з глюкозою і інкубують протягом 24 год. за температури (37 +- 1) град.С. Якщо за цей час в середовищі відбувається утворення кислоти і газу, то це підтверджує належність мікроорганізмів до бактерій групи кишкових паличок.
Ознакою газоутворення є поява пухирців газу в скляному поплавці або агаризованому середовищі; про утворення кислоти свідчить пожовтіння середовища. При відсутності газоутворення і пожовтіння середовища отримують негативний результат - БГКП відсутні в папері (картоні), при їх наявності - позитивний - БГКП присутні в папері (картоні).