Приготування суспензії мікобактерій з позитивних проб (після культивування в пробірці MGIT) для постановки ТМЧ в рідкому середовищі в системі BACTEC MGIT.
Важливим фактором є «вік» культури в днях, що пройшов з моменту, коли було отримано позитивну культуру в системі MGIT.
День, у який цю культуру було вперше ідентифіковано системою як позитивну, вважається «нульовим» (день 0).
Для одержання культури, придатної до подальших тестів на ТМЧ, пробірку потрібно інкубувати в системі щонайменше ще добу (тобто до дня 1). Якщо простір у системі є критичним чинником, що стримує швидкість роботи, пробірка може бути вилучена із системи після дня 0 (тобто після одержання позитивної відповіді) і культивуватися в наступні дні в термостаті за температури 37 ° C.
Культура є придатною для посіву на ТМЧ протягом п’яти днів після дня 0 (тобто впродовж днів 1–5).
Якщо культура інкубувалась у системі або термостаті довше ніж 5 днів після повідомлення про позитивний результат (тобто починаючи із шостої доби і далі), вона непридатна для проведення ТМЧ у системі MGIT. Для того, щоб зробити ТМЧ із позитивної культури (MGIT «+»), що була витримана в термостаті довше ніж п’ять діб, потрібно здійснити її субкультивування, тобто 0,5 мл цієї культури потрібно посіяти у нову пробірку MGIT і культивувати в апараті до отримання позитивного результату.
Процедури підготовки культури для ТМЧ трохи розрізнюються залежно від «віку» культур (тобто днів, що пройшли з моменту одержання позитивного результату).
Проведення ТМЧ із культури віком 1-2 дні (додаток 12):
струсити пробірку (бажано на вортексі) для гомогенізації й подрібнення наявних згустків (скупчень мікобактерій);
залишити пробірку на 5-10 хв для осадження великих часток;
використовувати надосадову рідину для інокуляції пробірок із препаратами.
Проведення ТМЧ із культури віком 3-5 днів:
струсити пробірку (бажано на вортексі) для гомогенізації й подрібнення наявних згустків (скупчень мікобактерій);
залишити пробірку на 5-10 хв для осадження великих часток;
до окремої стерильної пробірки перенести 1,0 мл надосадової рідини й додати 4,0 мл стерильного ізотонічного розчину NаСl, щоб отримати, таким чином, розведення 1 : 5. Використовувати його для інокуляції пробірок із препаратами.
Приготувати розведення суспензії мікобактерій 1 : 100 для посіву контрольних пробірок SIRЕ. Для цього додати 0,1 мл суспензії мікроорганізмів (надосадової рідини 1-2-денної культури або розведення 1 : 5 3-5 денної культури) до пробірки з 10,0 мл стерильного ізотонічного розчину NaС1. Добре перемішати й використовувати для посіву в контрольні пробірки (без препаратів).
Під час тестування на стійкість до Z для посіву в контрольну пробірку Z готують розведення 1 : 10 (не 1 : 100). Для одержання такого розведення додати 0,5 мл суспензії (розведення 1 : 5 для 3-5-денної культури або суспензії 1-2-денної культури) до пробірки з 4,5 мл. Використовувати це розведення для інокуляції контрольних пробірок під час тестування стійкості до Z.