Принцип каталазної реакції полягає в розщеплені перекису водню ферментом каталази на воду й атомарний кисень, що супроводжується виділенням пухирців кисню та переходом пірогалолу в пурпурогалін за наявності перекису водню під впливом пероксидази.
Реактиви:
0,5 % пірогалол: 50,0 мг чистого пірогалолу розчинити в 10,0 мл дистильованої води;
2,0 % пергідроль: 0,2 мл пергідролю розвести в 10,0 мл дистильованої води.
Обидва розчини готують безпосередньо перед дослідом, змішуючи й наливаючи отриману суміш у пробірку так, щоб покрити культуру.
Обидва розчини зливають у колбу в рівній кількості і наливають по 6,0-8,0 мл суміші у пробірку з культурою. Залежно від кількості культур, що перевіряють, об’єм розчинів, які готують, відповідно збільшують.
Облік реакції активності каталази проводять через 5 хв після активного виділення пухирців кисню. Реакцію на пероксидазу враховують через 1,5-2 год після забарвлення колоній у темно-коричневий колір.
Ступінь активності каталази оцінюють за трибальною системою:
(3+) - рясне виділення пухирців кисню в першу хвилину;
(2+) - помірне виділення пухирців кисню;
(1+) - поодинокі пухирці.
За відсутності пухирців реакція вважається негативною (–).
Активність пероксидази також оцінюється за трибальною системою:
(3+) - темно-коричневе забарвлення колоній;
(2+ ) - коричневе забарвлення колоній;
(1+) - блідо-коричневе забарвлення колоній.
У разі негативної реакції колір колоній не змінюється.
Цінною реакцією для відрізнення М. tuberculosis від нетуберкульозних мікобактерій є проба на термостабільність каталази.
Каталаза у кислотостійких мікобактерій різна. У вірулентних мікобактерій вона швидко й легко руйнується під час нагрівання до температури 65-68 ° C. У НТМБ і кислотостійких сапрофітів вона термостабільна.
Готують 3,0 мл густої зависі мікобактерій. 1,5 мл зависі переносять до центрифужної пробірки, яку нагрівають на водяній бані за температури +68 ° C протягом 10 хв. Потім пробірку охолоджують і наносять на предметне скло по 1 краплі зависі: на один кінець - непрогріту (слугує контролем), а на другу - завись після нагрівання. До цих двох зависів додають по 1 краплі пергідролю. Утворення пухирців свідчить про активність ферменту, а відсутність - про пригнічення.
На підставі цієї реакції легко відрізнити М. tuberculosis, у яких каталаза завжди термолабільна, від більшості НТМБ і кислотостійких сапрофітів із різко термостабільною каталазою.
Термостабiльнiсть каталази, так само як і її активність, оцінюють за трибальною системою.