M. tuberculosis чутливі до нікотинаміду. M. bovis і вакцинний штам M. bovis-BCG мають природну резистентність до нікотинаміду. На цій властивості заснована диференціація M. tuberculosis complex.
Реактиви:
середовище Левенштейна-Єнсена (до згортання);
нікотинамід.
Для приготування основного розчину нікотинаміду потрібно наважку нікотинаміду 1 000 мг розчинити в 10,0 мл стерильної дистильованої води, стерилізувати через бактерійний фільтр або кип’ятінням на водяній бані за температури 100 ° C протягом 30 хв.
Розчин А: до 4,0 мл дистильованої води додати 1,0 мл основного розчину. Розведення - 20,0 мг/мл.
Розчин Б: до 3,0 мл дистильованої води додати 2,0 мл основного розчину. Розведення - 40,0 мг/мл.
Приготування середовища з нікотинамідом:
до 95,0 мл середовища Левенштейна-Єнсена додати 5,0 мл робочого розчину А; кінцева концентрація - 1,0 мг/мл;
до 95,0 мл середовища Левенштейна-Єнсена додати 5,0 мл робочого розчину Б; кінцева концентрація - 2,0 мг/мл;
одночасно приготувати 100 мл контрольного середовища Левенштейна-Єнсена.
Досліджуване і контрольне середовища розлити в пробірки по 5,0 мл, згортати за температури +85 ° C протягом 30 хв.
По 0,2 мл досліджуваної культури в стандартному розведенні засівається на приготовані середовища; інкубація - за температури +37 ° C протягом трьох тижнів.
У всіх штамів M. bovis-BCG спостерігається стійкість до 30,0-50,0 мкг/мл циклосерину. Ця біологічна особливість вакцинного штаму BCG є важливим діагностичним тестом у його ідентифікації.
Реактиви:
середовище Левенштейна-Єнсена (200 мл до згортання);
циклосерин.
Наважку циклосерину 20,0 мг потрібно розчинити в 5,0 мл дистильованої води, розведення - 4 000 мкг/мл.
До 99,0 мл середовища Левенштейна-Єнсена додати 1,0 мл приготованого розчину. Кінцева концентрація препарату - 40,0 мкг/мл.
Одночасно приготувати 100 мл контрольного середовища.
Досліджуване і контрольне середовища розлити в пробірки по 5,0 мл, згортати за температури +85 ° C протягом 45 хв.
По 0,2 мл досліджуваної культури в стандартному розведенні засівається на приготовані середовища; інкубація - за температури 37 ° C протягом трьох тижнів.