Біохімічні, імунологічні й молекулярно-біологічні дослідження M. tuberculosis привели до виявлення декількох антигенів, які виявилися корисними для розробки досконаліших методів і комерційних тестів ідентифікації M. tuberculosis.
M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti), як відомо, продукують, тобто виділяють в живильне середовище, більше ніж 30 різних білків, де один із переважаючих - MPT64 (MPB64). Було встановлено, що НТМБ не продукують цього білка, тому виявлення MPT64 (MPB64) у пробі свідчить про належність дослідного штаму до комплексу M. tuberculosis.
Імунохроматографію можна віднести до групи реакцій із міченими антитілами. У реакції використовують моноклональні антитіла до шуканого антигена, адсорбовані на мікрочастках (забарвлений латекс або частки колоїдного золота), і моноклональні антитіла до того самого антигена, імобілізовані у вигляді смуги на хроматографічному папері. Крім того, у цій реакції є внутрішній контроль (антивидові антитіла, також закріплені у вигляді смуги на хроматографічному папері).
Тест-системи, що базуються на цьому принципі, мають високу специфічність. Такий метод може бути використано для швидкої ідентифікації комплексу M. tuberculosis, отриманих із рідких і твердих живильних середовищ.
Підготовлений дослідний матеріал (суспензія мікобактерій або позитивна рідка культура) у невеликій кількості (100 мкл) вноситься в стартове вікно тест-системи. Тут відбувається взаємодія антигена з антитілами, адсорбованими на частках, і починається рух комплексів, що утворилися, за рахунок капілярності паперу. Дійшовши до антитіл, розміщених на папері у вікні обліку результату, ці комплекси зв’язуються. При цьому частки латексу або колоїдного золота проявляються у вигляді лінії блакитного (латекс) або коричневого кольору.
Наявність смуги у вікні обліку результату свідчить про належність дослідного штаму до комплексу M. tuberculosis, а відсутність - про належність дослідного штаму мікобактерій до НТМБ. Оскільки частки, навантажені антитілами, беруться в надлишку, частина їх рухається далі і зв’язується у вікні внутрішнього контролю реакції. Смуга в цьому вікні свідчить про правильну роботу тест-системи. У разі відсутності смуги внутрішнього контролю реакції результатів інтерпретувати не можна. Інтерпретація результатів тесту проводиться через 15 хв після внесення суспензії мікобактерій у стартове вікно. Виконувати дослідження слід відповідно до інструкції виробника.
Відразу ж після отримання нової партії тестів має бути проведене тестування свідомо позитивних і негативних проб для того, щоб перевірити, чи не сталося пошкодження тестів у ході транспортування.
Внутрішній контроль якості досліджень проводиться щоразу під час проведення тестування.
Як позитивний контроль може бути використано:
музейний штам H 37 R v або клінічний ізолят M. tuberculosis;
суспензію 1,0 мкл (еквівалент 1 петлі діаметром 1,0 мм) колоній M. bovis BCG в 0,2 мл 10 ммоль/л фосфатно-сольового буфера, що містить 0,1 % твіну-80;
рідку культуру M. bovis BCG (McFarland 1 (3-6 × 10 - 7 КУО/мл), вирощену в рідкому середовищі.
Слід мати на увазі, що деякі штами M. bovis BCG (Glaxo, пастерівський, тайський) не експресують MPT64 або MPB64. Тому тільки бразильський, японський (Токіо), російський, шведський штами M. bovis BCG можна використовувати як позитивний контроль.
Як негативний контроль може бути використано:
незасіяне рідке середовище;
10,0 ммоль/л фосфатно-сольового буфера, що містить 0,1 % твіну-80;
будь-яку НТМБ, наприклад, М. smegmatis або М. gordonae.