Розчин їдкого натру токсичний відносно як супутніх мікроорганізмів, так і М. tuberculosis. Тому під час використання цього методу потрібно суворо дотримуватися зазначених термінів обробки.
Приготування розчинів:
4,0 % розчин їдкого натру (NaOH):
40,0 г їдкого натру заливають дистильованою водою до об’єму 1 000 мл;
10,0 % розчин соляної кислоти:
10,0 мл концентрованої соляної кислоти додають до 90,0 мл дистильованої води.
Розчини стерилізують в автоклаві за температури +121 ° C протягом 20 хв.
Для обробки досліджуваний матеріал, який перебуває в стерильному контейнері, залити подвійним об’ємом 4,0 % розчину їдкого натру і помістити на 10-30 с на струшувач.
Витримати отриману суміш 15 хв за кімнатної температури з періодичним ручним струшуванням. При цьому не варто перевищувати часу експозиції.
Стерильною піпеткою об’ємом 5,0-10,0 мл перенести оброблений матеріал у пробірки.
Пробірки врівноважити і центрифугувати матеріал за 3 000 g протягом 15 хв.
Стерильною піпеткою об’ємом 5,0-10,0 мл перенести надосадову рідину в ємкість з дезінфікуючим розчином, залишивши в пробірці 0,8-1,2 мл осаду.
До осаду додати стерильної піпеткою 15,0 мл стерильного 0,9 % розчину хлориду натрію.
Пробірки врівноважити і повторно центрифугувати матеріал за 3 000 g протягом 15 хв.
Стерильною піпеткою об’ємом 5,0-10,0 мл перенести надосадову рідину в ємність з дезінфікуючим розчином, залишивши в пробірці 1,2-1,5 мл осаду.
До осаду додати 0,5-1,0 мл буферного розчину для отримання нейтрального значення рН.
Закрити пробірку і струснути її вміст. Пробірку з осадом помістити в штатив, розмістивши її у порядку реєстраційних номерів матеріалу.