Промарковані й зафіксовані мазки поміщають на підставку («рейки») так, щоб вони не торкалися один одного. Не слід забарвлювати одночасно більше ніж 12 скелець.
На кожне скельце наливають крізь воронку з паперовим фільтром забарвлюючий розчин на 15-20 хв. Не слід підігрівати мазків і користуватися смужками фільтрувального паперу.
Промивають мазок дистильованою водою. Водопровідна вода містить з’єднання хлору, які можуть вплинути на флюоресценцію.
На скельце наливають знебарвлювальний розчин і залишають на 2 хв.
Промивають мазок дистильованою водою.
Знебарвлений мазок дофарбовують розчином перманганату калію, акридинового помаранчевого або метиленового синього з використанням воронки з паперовим фільтром упродовж 2 хв.
Промивають мазок дистильованою водою.
Залишають препарат на повітрі за кімнатної температури у вертикальному або похилому положенні для висихання. Не слід промокати препарат. Можливе висушування мазків у сухожаровій шафі малого об’єму впродовж 10 хв за температури +110 ° C.
Під час використання перманганату калію час його дії не повинен перевищувати 2 хв.
Точність експозиції має вирішальне значення, оскільки в разі перевищення часу експозиції інтенсивність флуоресценції може зменшуватися.