Кожну нову партію реагентів (бульйон Мідлбрука 7Н9, ростова добавка MGIT 960 Supрlement) перевіряють на якість під час отримання (вхідний контроль) та періодично (у разі збільшення кількості проростів) перед використанням. Контролюють термін придатності, проводять візуальний огляд пробірок на цілісність та наявність забруднень. Для роботи використовують лише цілі пробірки з прозорим бульйоном без сторонніх домішок із достатнім терміном придатності.
Для перевірки ростових властивостей рідкого середовища рекомендується використовувати контрольні штами: M. tuberculosis H37Rv ATCC 27294, M. kansasii ATCC 12478, M. fortuitum ATCC 6841.
Підготовка суспензії культури:
використовують 10-15 добові культури вищевказаних штамів, вирощені на середовищі Левенштейна-Єнсена;
за допомогою стерильного аплікатора зняти з поверхні середовища всі колонії, не допускаючи знімання середовища;
обережно перенести зняту культуру до пробірки з кришкою, що герметично загвинчується, яка містить 4,0 мл стерильного бульйону Міддлбрука 7Н9 (пробірка А);
приготувати суспензію, ретельно струшуючи пробірку з культурою на струшувачі-вортексі протягом 1-2 хв (мутність більше ніж 1,0 McF);
залишити суспензію на 20 хв для осадження великих часток;
за допомогою стерильної одноразової піпетки перенести надосадову рідину до стерильної скляної пробірки з кришкою, що герметично загвинчується (пробірка В);
залишити суспензію на 15 хв за кімнатної температури;
за допомогою стерильної одноразової піпетки перенести надосадову рідину до стерильної скляної пробірки з кришкою, що герметично загвинчується (пробірка С);
довести мутність суспензії в пробірці С до 0,5 McF, додаючи бульйон Міддлбрука або ізотонічний розчин хлориду натрію, добре перемішати. Це робоча суспензія для проведення контролю якості, яку можна розлити по 1,0-2,0 мл у кріопробірки та заморозити до температури -70 ° C. Заморожена суспензія може використовуватись упродовж шести місяців. Не допускати повторного заморожування робочої суспензії.
Якщо суспензія була заморожена, її розморожують та використовують для контролю якості. Розморожена суспензія повторному заморожуванню не підлягає. Невикористані залишки мають бути знешкоджені.
Для приготування розведень замість стерильної дистильованої води можна використовувати стерильний ізотонічний розчин хлориду натрію.
Порядок приготування:
розвести робочу суспензію (0,5 McF), щойно приготовлену або розморожену, у співвідношенні 1 : 5 (до 1,0 мл суспензії додати 4,0 мл стерильної дистильованої води), ретельно перемішати (пробірка 1);
розвести ще два рази у співвідношенні 1 : 10, додаючи 0,5 мл суспензії із пробірки 1 до 4,5 мл стерильної дистильованої води (пробірка 2). Ретельно перемішати і знову додати 0,5 мл із пробірки 2 до 4,5 мл стерильної дистильованої води. Ретельно перемішати. Остаточне розведення 1 : 500 (пробірка 3). Це останнє розведення M. tuberculosis, яке використовується для проведення контролю якості.
Розведення для M. fortuitum та M. kansasii готують аналогічно, крім того, для M. fortuitum потрібно додатково приготувати розведення із пробірки 3 у співвідношенні 1 : 10. Взяти 0,5 мл суспензії із пробірки 3 і додати 4,5 мл стерильної дистильованої води, ретельно перемішати. Остаточне розведення 1 : 5000 (пробірка 4). Для проведення контролю якості використовують вміст пробірки 4.
Для M. kansasii розвести вміст пробірки 4 ще раз у співвідношенні 1 : 10 додаючи 0,5 мл із пробірки 4 до 4,5 мл стерильної дистильованої води, ретельно перемішати. Остаточне розведення 1 : 50000 (пробірка 5). Для проведення контролю якості використовують вміст пробірки 5.
Посів та інкубація:
додати до шести пробірок MGIT ростову добавку Growth Supplement та суміш антибіотиків PANTA відповідно до методики;
засіяти до двох промаркованих пробірок MGIT по 0,5 мл суспензії M. tuberculosis H37Rv із пробірки 3. Так само засіяти до двох пробірок по 0,5мл суспензії M. fortuitum із пробірки 4 та до двох пробірок суспензії M. kansasii з пробірки 5. Ретельно перемішати;
помістити засіяні пробірки до апарата ВАСТЕС MGIT 960. Після отримання позитивної індикації на апараті дістати пробірки. Оцінити дані після закінчення терміну, потрібного для отримання позитивного результату.
Очікувані результати:
M. tuberculosis - позитивна флуоресценція в пробірках через 6-10 днів;
M. fortuitum - позитивна флуоресценція в пробірках через 7-11 днів;
M. kansasii - позитивна флуоресценція в пробірках через 1-3 дні.
Якщо росту в зазначені терміни не отримано, дослідження з контролю якості повторюють. Якщо вдруге результати з контролю якості залишаються незадовільними, потрібно перевірити життєздатність суспензії, вік культури (якщо вона була заморожена) та інші процедури. Якщо всі параметри відповідають установленим специфікаціям, а результат тестування незадовільний, слід звернутися до сервісної служби компанії BD Diagnostic System.
Заходи безпеки:
усі процедури здійснюють у ШББ 2-го класу;
усі матеріали перед використанням має бути простерилізовано шляхом автоклавування;
усі процедури виконують із дотриманням вимог безпеки праці та протиепідемічного режиму.