Для приготування яєчних щільних живильних середовищ (Левенштейна-Єнсена, Фінна-II) використовують свіжі курячі яйця (яким не більше ніж 7 днів), із цілою незабрудненою шкаралупою.
Температура та час згортання яєчних середовищ підлягають обов’язковому контролю за допомогою повірених максимальних термометрів. Результати контролю вносять до журналу або листа контролю роботи коагулятора, який ведуть у довільній формі, відображаючи інформацію про дату контролю, температуру та тривалість коагуляції за підписом відповідальної особи.
Готове яєчне середовище оцінюють візуально: колір, консистенція, наявність забруднення.
За відсутності візуально виявлених дефектів партію приготовлених яєчних середовищ перевіряють на стерильність та на ростові властивості.
Приготовлене яєчне середовище зберігають у холодильнику не довше ніж 4 тижні.
Для отримання якісного середовища і запобігання його забрудненню сторонньою мікрофлорою рекомендують виконувати такі основні правила:
- приміщення, де готують живильні середовища, утримують у максимальній чистоті. Рекомендовано регулярно мити підлогу з додаванням дезінфікуючого засобу, а також протирати дезінфектантом обладнання та робочі поверхні. Перед приготуванням середовищ потрібно обробити приміщення УФ-променями;
- розливати середовища слід у ШББ 2 класу. Використовувати тільки стерильний посуд;
- використовувати точно зважені кількості реагентів;
- правильно проводити розведення розчинів: використовувати мірний посуд, доводити об’єм розчину по нижній межі меніска;
- постійно контролювати температуру в згортувачі, не допускаючи перегріву середовищ у ньому;
- суворо дотримуватися правил асептики, обпалювати горло пробірок і колб;
- ретельно обробляти поверхню яєць перед їх розбиванням для приготування яєчної суспензії;
- не піддавати готове середовище дії УФ-променів. Зберігати готові середовища в темному місці, в умовах холодильника;
- рекомендовано розливати не менше ніж по 5,0 см - 3 середовища;
- проводити контроль якості кожної партії приготованих середовищ.
Можливі причини приготування неякісного середовища:
неякісні вихідні реагенти;
невідповідний термін придатності реагентів;
невідповідна якість яєць;
недотримання температурного режиму згортання середовища;
неякісна стерилізація посуду;
невідповідна якість кришок для пробірок (нещільне прилягання до пробірки);
порушення температури культивування в термостаті.
Чутливість живильного середовища перевіряється аналізом співвідношень:
позитивна мікроскопія від хворого супроводжується негативним результатом культурального дослідження (допускається до 2,0 %);
позитивна мікроскопія (3+) супроводжується ростом поодиноких (10-20) колоній (допускається 1,0-2,0 %).
Як усі мікробіологічні середовища, кров’яний агар, виготовлений у лабораторних умовах, підлягає контролю якості. У кожній новій серії приготованого середовища 1,0-3,0 % чашок (залежно від розміру партії) перевіряють на стерильність і ростові властивості. Для контролю ростових властивостей використовуються контрольні штами Escherichia coli та Staphylococcus aureus (референс-штами).
Для зберігання в замороженому стані контрольних штамів E. coli та S. aureus приготувати густу суспензію культури у триптиказо-соєвому або живильному бульйоні з гліцерином (15,0 %) і розлитому по 1,5 мл у підписані кріопробірки. Заморозити і зберігати за температури -70 ° C.
Приготувати суспензію колоній зі щільного бактеріологічного середовища у стерильному ізотонічному розчині або стерильній дистильованій воді щільністю 0,5 McFarland (може бути використана розморожена суспензія, що є у наявності, і розведена до тієї самої щільності).
Зробити 100-кратне розведення, додаючи 10,0 мкл суспензії до 1,0 мл стерильного ізотонічного розчину або стерильної дистильованої води. Добре перемішати. Отримати розведення 10 -2 .
Зробити ще одне 100-кратне розведення, помістивши 10,0 мкл із пробірки з розведенням 10 -2 в 1,0 мл стерильного ізотонічного розчину або дистильованої води. Посіяти на чашку 100 мкл отриманого розведення 10 -4 і розподілити по поверхні кров’яного агару для отримання ізольованих колоній.
Помістити в термостат на 48 год за температури 35-37 ° C.
Таку саму кількість незасіяних чашок із кров’яним агаром помістити до термостата на 48 год за температури 35-37 ° C для перевірки на стерильність.
Задовільними вважають такі результати: відсутність росту на незасіяних чашках і типовий ріст бактерій у чашках із посівами.
Результати контролю внести до Журналу контролю якості середовищ.