Інструкція з проведення тестування племінних тварин за ДНК-маркерами, п. 3.4.3

Чинна редакція від 01.06.2004 · Інструкція набрав чинності 27.06.2004

Інструкція з проведення тестування племінних тварин за ДНК-маркерами

Проведення реакції

В ампліфікаційну пробірку (0,5 мл) уносять компоненти реакції: реакційну суміш, праймери-затравки для синтезу вибраної ділянки ДНК, термостабільну ДНК-полімеразу, зразок ДНК тварини і воду, доводячи до кінцевого об'єму 25 мкл.

Конкретна кількість реактивів (мкл) залежить від концентрації, у якій вони поставляються фірмами-виробниками. Реакційна суміш завжди вміщує 1-кратний реакційний буфер, а кількість у ній іонів Mg ++ може коливатися в діапазоні від 1,5 до 3 мМ. Кількість полімерази, що вноситься, залежить від її активності. Уносять 1-2 одиниці активності фермента (0,1-0,5 мкл). Загальну кількість реактивів розраховують у відповідності до числа зразків, які ампліфікують. Збирають в окрему пробірку всі компоненти реакції, крім зразка ДНК, після ретельного перемішування розносять в окремі пробірки. Пробірки заздалегідь маркують відповідно до зразків ДНК. Для запобігання випаровуванню на реакційну суміш до кожної пробірки наносять шляхом нашаровуванню мінеральне масло.

Для ДНК-діагностики стрес-синдрому у свиней як один з можливих варіантів використовують праймери: